וואָס איז פּאָליאַקרילאַמידע געל עלעקטראָפאָרעסיס?

פּאָליאַקרילאַמידע געל עלעקטראָפאָרעסיס

געל עלעקטראָפאָרעסיס איז אַ פונדאַמענטאַל טעכניק אין לאַבאָראַטאָריעס אַריבער די בייאַלאַדזשיקאַל דיסאַפּלאַנז, וואָס אַלאַוז די צעשיידונג פון מאַקראָמאָלעקולעס אַזאַ ווי דנאַ, רנאַ און פּראָטעינס. פאַרשידענע צעשיידונג מידיאַ און מעקאַניזאַמז לאָזן סאַבסעץ פון די מאַלאַקיולז צו זיין אפגעשיידט מער יפעקטיוולי דורך עקספּלויטינג זייער גשמיות קעראַקטעריסטיקס. פֿאַר פּראָטעינס אין באַזונדער, פּאָליאַקרילאַמידע געל עלעקטראָפאָרעסיס (PAGE) איז אָפט די טעכניק פון ברירה.

PAGE איז אַ טעכניק וואָס סעפּערייץ מאַקראָמאָלעקולעס אַזאַ ווי פּראָטעינס באזירט אויף זייער ילעקטראָופאָרעטיק מאָביליטי, דאָס איז די פיייקייט פון אַנאַליטעס צו מאַך צו אַן ילעקטראָוד פון די פאַרקערט אָפּצאָל. אין PAGE, דאָס איז באשלאסן דורך די אָפּצאָל, גרייס (מאָלעקולאַר וואָג) און פאָרעם פון די מאַלאַקיול. אַנאַליטעס מאַך דורך פּאָרעס געשאפן אין פּאָליאַקרילאַמידע געל. ניט ענלעך דנאַ און רנאַ, פּראָטעינס בייַטן אין אָפּצאָל לויט די אַמינאָ אַסאַדז ינקאָרפּערייטיד, וואָס קענען השפּעה ווי זיי לויפן. אַמינאָ זויער סטרינגס קען אויך פאָרעם צווייטיק סטראַקטשערז וואָס פּראַל אויף זייער קלאָר גרייס און דעריבער ווי זיי זענען ביכולת צו רירן דורך די פּאָרעס. עס קען דעריבער מאל זיין דיזייראַבאַל צו דענאַטורע פּראָטעינס איידער עלעקטראָפאָרעסיס צו לינעאַריזירן זיי אויב אַ מער פּינטלעך אָפּשאַצונג פון גרייס איז פארלאנגט.

SDS PAGE

סאָדיום-דאָדעסיל סאַלפייט פּאָליאַקרילאַמידע געל עלעקטראָפאָרעסיס איז אַ טעכניק געניצט צו באַזונדער פּראָטעין מאַלאַקיולז פון מאסע 5-250 kDa. די פּראָטעינס זענען אפגעשיידט בלויז אויף דער באזע פון ​​זייער מאָלעקולאַר וואָג. סאָדיום דאָדעסיל סאַלפייט, אַן אַניאָניק סורפאַקטאַנט, איז מוסיף אין דער צוגרייטונג פון דזשעלז וואָס מאַסקס די ינטרינסיק טשאַרדזשיז פון די פּראָטעין סאַמפּאַלז און געבן זיי אַ ענלעך אָפּצאָל צו מאַסע פאַרהעלטעניש. אין פּשוט ווערטער, עס דענאַטשערז די פּראָטעינס און גיט זיי אַ נעגאַטיוו אָפּצאָל.

געבוירן בלאַט

געבוירן בלאַט איז אַ טעכניק וואָס ניצט ניט-דענאַטורעד דזשעלז פֿאַר די צעשיידונג פון פּראָטעינס. ניט ענלעך SDS PAGE, קיין דענאַטורינג אַגענט איז צוגעגעבן אין דער צוגרייטונג פון דזשעלז. ווי אַ רעזולטאַט, די צעשיידונג פון פּראָטעינס נעמט אָרט אויף דער באזע פון ​​אָפּצאָל און גרייס פון פּראָטעינס. אין דעם טעכניק, די קאַנפאָרמיישאַן, פאָלדינג און אַמינאָ זויער קייטן פון פּראָטעינס זענען די סיבות וואָס די צעשיידונג איז אָפענגיק אויף. די פּראָטעינס זענען נישט דאַמידזשד אין דעם פּראָצעס, און קענען זיין ריקאַווערד נאָך די קאַמפּלישאַן פון צעשיידונג.

ווי טוט פּאָליאַקרילאַמידע געל עלעקטראָפאָרעסיס (PAGE) אַרבעט?

די גרונט פּרינציפּ פון PAGE איז צו צעטיילן אַנאַליטעס דורך פאָרן זיי דורך די פּאָרעס פון אַ פּאָליאַקרילאַמידע געל מיט אַן עלעקטריש קראַנט. צו דערגרייכן דעם, אַ אַקרילאַמידע-ביסאַקרילאַמידע מישן איז פּאַלימערייזד (פּאַליאַקרילאַמידע) דורך די אַדישאַן פון אַמאָוניאַם פּערסאַלפייט (אַפּס). דער אָפּרוף, וואָס איז קאַטאַלייזד דורך טעטראַמעטהילעטהילענעדיאַמינע (TEMED), פארמען אַ נעץ ווי סטרוקטור מיט פּאָרעס דורך וואָס אַנאַליטעס קענען מאַך (פיגורע 2). די העכער די פּראָצענט פון גאַנץ אַקרילאַמידע אַרייַנגערעכנט אין די געל, די קלענערער די פּאָרע גרייס, דערפאר די קלענערער די פּראָטעינס וואָס וועט קענען צו פאָרן דורך. די פאַרהעלטעניש פון אַקרילאַמידע צו ביסאַקרילאַמידע וועט אויך פּראַל די פּאָרע גרייס, אָבער דאָס איז אָפט קעסיידער קעסיידערדיק. סמאָלער פּאָרע סיזעס אויך רעדוצירן די גיכקייַט אין וואָס קליין פּראָטעינס זענען ביכולת צו רירן דורך די געל, ימפּרוווינג זייער האַכלאָטע און פּרעווענטינג זיי פון לויפן אַוועק אין די באַפער ראַפּאַדלי ווען קראַנט איז געווענדט.

עקוויפּמענט פֿאַר פּאָליאַקרילאַמידע געל עלעקטראָפאָרעסיס

געל עלעקטראָפאָרעסיס צעל (טאַנק / קאַמער)
די געל טאַנק פֿאַר פּאָליאַקרילאַמידע געל עלעקטראָפאָרעסיס (PAGE) איז אַנדערש פון די אַגאַראָסע געל טאַנק. די אַגאַראָסע געל טאַנק איז האָריזאָנטאַל, בשעת די PAGE טאַנק איז ווערטיקאַל. דורך ווערטיקאַל עלעקטראָפאָרעסיס צעל (טאַנק / קאַמער), אַ דין געל (נאָרמאַלי 1.0 מם אָדער 1.5 מם) איז אויסגעגאסן צווישן צוויי גלאז פּלאַטעס און מאָונטעד אַזוי אַז די דנאָ פון די געל איז סאַבמערדזשד אין באַפער אין איין קאַמער און די שפּיץ איז סאַבמערדזשד אין באַפער. אי ן אנדער ע קאמער . ווען קראַנט איז געווענדט, אַ קליין סומע פון ​​באַפער מייגרייט דורך די געל פון די שפּיץ קאַמער צו די דנאָ קאַמער. מיט שטאַרק קלאַמפּס צו גאַראַנטירן די פֿאַרזאַמלונג סטייז אין אַ אַפּרייט שטעלע, די עקוויפּמענט פאַסילאַטייץ שנעל געל ראַנז מיט אפילו קאָאָלינג ריזאַלטינג אין בוילעט באַנדס.

בעידזשינג ליוי ביאָטעטשנאָלאָגי קאָו, לטד (ליוי ביאָטעטשנאָלאָגי) מאַניאַפאַקטשערז אַ קייט פון סיזעס פון פּאָליאַקרילאַמידע געל עלעקטראָפאָרעסיס סעלז (טאַנגקס / טשיימבערז). די מאָדעלס DYCZ-20C און DYCZ-20G זענען ווערטיקאַל עלעקטראָפאָרעסיס סעלז (טאַנגקס / טשיימבערז) פֿאַר דנאַ סיקוואַנסינג אַנאַליסיס. עטלעכע פון ​​די ווערטיקאַל עלעקטראָפאָרעסיס סעלז (טאַנגקס / טשיימבערז) זענען קאַמפּאַטאַבאַל מיט בלאָטינג סיסטעם, ווי די מאָדעל DYCZ-24DN, DYCZ-25D און DYCZ-25E זענען קאַמפּאַטאַבאַל מיט די מערב בלאָטינג סיסטעם מאָדעל DYCZ-40D, DYCZ-40G און DYCZ-40F, וואָס זענען געניצט פֿאַר טראַנספערינג די פּראָטעין מאַלאַקיול פון די געל צו מעמבראַנע. נאָך SDS-PAGE עלעקטראָפאָרעסיס, מערב בלאָטינג איז אַ טעכניק צו דעטעקט אַ ספּעציפיש פּראָטעין אין אַ פּראָטעין געמיש. איר קענען קלייַבן די בלאָטינג סיסטעמען לויט די יקספּערמענאַל רעקווירעמענץ.

עלעקטראָפאָרעסיס מאַכט צושטעלן
צו צושטעלן די עלעקטרע פֿאַר פליסנדיק די געל, איר וועט דאַרפֿן אַן עלעקטראָפאָרעסיס מאַכט צושטעלן. ביי Liuyi ביאָטעטשנאָלאָגי מיר צושטעלן אַ קייט פון עלעקטראָפאָרעסיס מאַכט סאַפּלייז פֿאַר אַלע אַפּלאַקיישאַנז. די מאָדעל DYY-12 און DYY-12C מיט הויך סטאַביל וואָולטידזש און קראַנט קענען טרעפן הויך וואָולטידזש פאָדערונג עלעקטראָפאָרעסיס. עס האט די פונקציע פון ​​שטיין, טיימינג, VH און שריט-דורך-שריט אַפּלאַקיישאַן. זיי זענען ידעאַל פֿאַר IEF און DNA סיקוואַנסינג עלעקטראָפאָרעסיס אַפּלאַקיישאַן. פֿאַר אַלגעמיין פּראָטעינס און דנאַ עלעקטראָפאָרעסיס אַפּלאַקיישאַן, מיר האָבן די מאָדעל DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, און אַזוי אויף, וואָס זענען אויך הייס סאַלעס מאַכט סאַפּלייז מיט עלעקטראָפאָרעסיס סעלז (טאַנגקס / טשיימבערז). די קענען זיין געוויינט פֿאַר מיטל און נידעריק וואָולטידזש עלעקטראָפאָרעסיס אַפּלאַקיישאַנז, אַזאַ ווי שולע לאַבאָראַטאָריע, שפּיטאָל לאַב און אַזוי אויף. מער מאָדעלס פֿאַר מאַכט סופּפּליעס, ביטע באַזוכן אונדזער וועבזייטל.

די ליוי סאָרט האט מער ווי אַ 50-יאָר געשיכטע אין טשיינאַ און די פירמע קענען צושטעלן סטאַביל און הויך-קוואַליטעט פּראָדוקטן אַרום די וועלט. דורך יאָרן אַנטוויקלונג, עס איז ווערט פון דיין ברירה!

פֿאַר מער אינפֿאָרמאַציע וועגן אונדז, ביטע קאָנטאַקט אונדז דורך E- בריוו[Email פּראָטעקטעד] or [Email פּראָטעקטעד].

רעפערענצן פֿאַר וואָס איז פּאָליאַקרילאַמידע געל עלעקטראָפאָרעסיס?
1. Karen Steward PhD פּאָליאַקרילאַמידע געל עלעקטראָפאָרעסיס, ווי עס אַרבעט, טעכניק וועריאַנץ און די אַפּלאַקיישאַנז